practica 9

viernes 26 de junio de 2009

practica 9
PRACTICA 9PRUEBA DE AGLUTINACIONMÉTODO DE PRUEBA RÁPIDA EN PLACA. Ejemplo de técnicaa) Al paciente se le realiza una venopunción, extrayendo la sangre en un tubo sin anticoagulante (Tapón rojo), y es centrifugada por 10 minutos a 3000 revoluciones por minuto. Se separa el suero el cual se utiliza para la determinación de los anticuerpos (puede extraerse con pipetas semiautomáticas).Marcar en una placa de vidrio correctamente indicando el antígeno que se esté usando:(En este caso serian los antígenos):Tífico “O” - Salmonella typhi; Antígeno somático, pH: 6.5 ± 1.0Tífico “H” - Salmonella typhi; Antígeno flagelar, pH: 6.5 ± 1.0NOTA: El reactivo así como los sueros, deben alcanzar la temperatura ambiente para comenzar la prueba.PROCEDIMIENTO:1. Depositar en sitios diferentes de la placa las siguientes cantidades del suero a analizar: 0.08mL, 0.04mL, 0.02mL, 0.01mL y 0.005 mL (EL SUERO DEBE ESTAR TOTALMENTE CLARO).2. Agitar el antígeno a utilizar para tener una suspensión uniforme.3. Añadir 30 mL de la suspensión de antígeno a cada una de las diferentes cantidades de suero. Se recomienda utilizar pipetas automáticas (el gotero incluido proporciona una gota de 30-40 mL).4. Mezclar el antígeno y el suero utilizando un aplicador diferente para cada una de las cantidades de suero.5. Girar la placa manualmente o utilizando un agitador mecánico (120 rpm) durante 2 minutos.6. Realizar la lectura utilizando una fuente de luz directa y observar la aglutinación macroscópica.7. Se recomienda incluir controles Positivo y Negativo.INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOSEl grado de aglutinación se registra como sigue:4+ Aglutinación del 100% de los organismos3+ Aglutinación del 75% de los organismos2+ Aglutinación del 50% de los organismos1+ Aglutinación del 25% de los organismos- Aglutinación del 0% de los organismosLIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO1. Algunos sueros normales pueden dar un titulo de 1:20 a 1:40 y hasta 1:80 pero esto puede ser debido a vacunaciones o alguna infección anterior. No siempre se presenta producción de aglutininas en infecciones bacterianas.2. Se pueden producir reacciones cruzadas de aglutininas debido a vacunaciones para ciertas enfermedades. La vacuna tífica puede producir aglutininas contra antígenos Proteus.3CONCLUSIÓN:El diagnóstico exacto de la enfermedad depende del acercamiento entre el laboratorio clínico y el médico, ya que la elevación del título en la muestra de suero con sintomatología reciente y la muestra de suero en fase convaleciente indicará la exactitud del diagnóstico. El paciente con salmonelosis cursa con un cuadro donde aparecen escalofríos , cefalea, náuseas, anorexia, tos y diarrea o estreñimiento. La fiebre es prolongada y varía de 38,5ºC a 40ºC. Entre un 20-40% presentan dolor abdominal. Se sugiere que se le realice al paciente un coprocultivo (cultivo de las heces fecales). Debe crecer salmonella, identificándose la especia por medio de pruebas bioquímicas.

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TINCION DE GRAM

Una ves puesto el campo de esterilizacion, se nos fue entregando el frotis ya antes realizado, ahora tubimos que colocar la preparacion fijada con la solucion de cristal violeta durante 1m, despues lo dejamos escurrir y luego lo metemos en yodo durante 1m, despues que haya pasado el minuto lo lavamos con algo y se mete en la otra solucion durante 30 seg, una ves echo eso lo dejamos secar y le ponemos una gota de aceite de imercion.y por ultimo lo observamos por el microscopio.

siembras en medios de cultivo

Siembras en Medios de cultivo


El alumno debe realizar una siembra en medio de cultivo de forma estriada, variada y aplicando el nombre de cada una de las que se dieron.
Materiales:
-5 o 7 cajas petri de medio de cultivo.
-Asa bacteriologica
-Vaso de precipitado con 25ml. de agua destilada.
-2 mecheros de bunsen
-Papel para mesa de laboratorio
-Tape
-Algodon secoAlgodones con alcohol
-Tubo conico de plastico
Muestras para siembras:
-Saliva
-Muestra interdental
-Orina
-Agua preparada
-Verduras
-Muestra de sangre
Tecnica de extraccion sanguinea:
Materiales:
-Jeringa 5ml.
-Torundas de algodon alcoholosadas
-Torniquete
Se realiza asepxia y antisepxia del pliegue del brazo utilizando una torunda de algodon con alcohol.Una vez realizado se debe asegurar la aguja a la jeringadandole un pequeño giro hasta que quede apretado. Una vez lista la jeringa y limpia la zona del pliegue se aplica el torniquete en la parte media del brazo para hacer precion t obtener una vaso dilatacion del conducto sanguineo, se intruduce la jeringa y se extraen 2.5ml. de sangre la que depositaremos en un tubo con tapon rojo sin anticuagulante.No se retita el tapon del tubo se introduce la aguja en el.Se deja coagular la sangre y se toma el tiempo se mete a la centrifuga para separar el paquete del plasma.Una vez separado el paquete del plasma se trasvasa a un tubo de ensaye vacio.Se sembrara el liquido plasmatico en medio de cultivo utilizando la tecnica con varilla de cristal denominada siembra por dispercion.
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Salmonella
es un género de bacteria que pertenece a la familia Enterobacteriaceae, formado por bacilos gramnegativos, anaerobios facultativos, con flagelos perítricos y que no desarrollan cápsula ni esporas. Son bacterias móviles que producen sulfuro de hidrógeno (H2S). Fermentan glucosa por poseer una enzima especializada, pero no lactosa, y no producen ureasa.Es un agente zoonótico de distribución universal. Se transmite por contacto directo o contaminación cruzada durante la manipulación, en el procesado de alimentos o en el hogar, también por vía sexual.Algunas salmonellas son comunes en la piel de tortugas y de muchos reptiles, lo cual puede ser importante cuando se manipulan a la vez este tipo de mascotas y alimentos.


Escherichia coli (E. coli)
es quizás el organismo procarionte más estudiado por el ser humano, se trata de una bacteria que se encuentra generalmente en los intestinos animales y por ende en las aguas negras. Fue descrita por primera vez en 1885 por Theodore von Escherich, bacteriólogo alemán, quién la denominó Bacterium coli. Posteriormente la taxonomía le adjudicó el nombre de Escherichia coli, en honor a su descubridor. Ésta y otras bacterias son necesarias para el funcionamiento correcto del proceso digestivo. Además produce vitaminas B y K. Es un bacilo que reacciona negativamente a la tinción de Gram (gramnegativo), es anaeróbico facultativo, móvil por flagelos peritricos (que rodean su cuerpo), no forma esporas, es capaz de fermentar la glucosa y la lactosa y su prueba de IMVIC es ++--.Es una bacteria utilizada frecuentemente en experimentos de genética y biotecnología molecular.

Proteus
es un genero de bacterias gramnegativas, que incluye patógenos responsables de muchas infecciones del tracto urinario.[1] Las especies de Proteus normalmente no fermentan lactosa por razón de tener una β galactosidasa, pero algunas se han mostrado capaces de hacerlo en el test TSI (Triple Sugar Iron). Son oxidasa-negativas y ureasa-positivas. Algunas especies son mótiles.[2] Tienden a ser organismos pleomórficos, no esporulados ni capsulados y son productoras de fenilalanina desaminasa.[3] Con la excepción de P. mirabilis, todos los Proteus reaccionan negativos con las bascterias
brucella
esun género de bacterias Gram negativas.[1] Son cocobacilos pequeños (0,5-0,7 por 0.6-1.5 µm), no-móviles y encapsulados. Se conocen unas pocas especies de Brucella, cada una de las cuales se diferencia ligeramente en la especificidad del huésped: B. melitensis infecta cabras y ovejas, B. abortus infecta vacas, B. suis infecta cerdos, B. ovis infecta ovejas y B. neotomae. Recientemente se ha descubierto una nueva especie en mamíferos marinos: B. pinnipediae.Brucella es la causa de la brucelosis, una verdadera enfermedad zoonótica (no se ha descrito la transmisión humano-a-humano).[1] Es transmitida por la ingestión de comida infectada, contacto directo con un animal infectado o por inhalación de aerosoles. La exposición infecciosa mínima está en 10-100 organismos. La brucelosis se produce principalmente por exposición ocupacional (por ejemplo, exposición al ganado, ovejas, cerdos), pero también por el consumo de productos lácteos no pasteurizados.

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ticiones..

tinciones

Mecanismos de Coloración:La coloración celular y tejidos son una combinación de fenómenos físicos y químicos de absorción: los fenómenos físicos de absorción, capilaridad y ósmosis participan en cierto grado. La afinidad de colorantes básicos por los tejidos ácidos y viceversa indican que hay reacción química.Los Colorantes:Son compuestos, orgánicos que contienen radicales cromóforos esto es que producen color y grupo de anxocromos que forman sales los grupos nitrito (-NO2) y azo (-N = N) son cromóforos. Los radicales hidroxilo (-OH) y amino (-NH2) son grupos anxocromos.

Los cromóforos imparten la propiedad cromógena al colorante y los anxocromos permiten que el colorante se una con la fibra o tejido.Preparación de Frotis Bacteriano para Coloración:Entes de la tinción las bacterias suelen encontrarse en agua o en otro líquido en un porta objeto limpio y son extendido en una película uniforme y delgada. Se deja que la película seque en el aire y los microorganismos son fijados por sustancias químicas o por el calor moderado.Tinciones:Es un método utilizado para estudiar microorganismos. (no vivos); en estas tinciones se observa morfología, estructura y agrupamientos de microorganismos.Tipos de Tinción:Tinción Simple: utiliza un solo colorante.Tinción de Gram:Utiliza varios colorantes (cristal violeta 1m, Yodo 1m, lavado con alcohol, Safranina 30 seg)Tinción Ácido Resistente:Una vez teñidos, conservan su color resistiendo al lavado con ácido mineral reducido. En esta tinción las bacterias ácido resistentes conservan el colorante primario color rosa o rojo, los demás microorganismos son decolorados por el ácido y toman el color azul.Tinción de Giensa:El colorante se aplica a un frotis de sangre y se utiliza cuando se sospeche de protozoos en la sangre para observar materias núcleos de la células.

Tinción de Esporas:Se usa verde de malaquita en contraste con safranina.Tinción de Cápsula:Colorante nigrosuna, aquí se observa microorganismos encapsulados creando resistencias.Tinción de Flagelos:Se usa mordiente el cual aumenta el tamaño del microorganismo.Endósporas:Son unos cuerpos resistentes que se producen en el interior de la célula los cuales contienen los componentes necesarios para conservar la vida.Las esporas pueden situarse en el centro de la célula o en situaciones excéntricas cerca de un extremo de la misma.Levaduras:Son esféricas, elípticas y cilíndricos, su tamaño varía notablemente.

Son hongos cuya forma corriente y dominante de crecimiento es unicelular.

Las Cápsulas:Son estructuras grueso viscosas gelatinosas que rodean las células de algunas especies.Sarcina:Son anaerobios obligados y son extremadamente ácido – tolerantes que pueden fermentar azúcares y crecer a pH inferior a 2.Este género comprende 2 especies de bacterias que se dividen en tres planos perpendiculares para producir paquetes de 8 en una célula.Bacillus Cereus:La mayoría se encuentra en el suelo o en partículas de polvo en suspensión y son uno de los organismos del género Bacillus que pueden ser aislados fácilmente.Puesto que los formadores de esporas pueden aislarse selectivamente a partir del suelo, alimentos o de otro material dejando las muestras a 80 ºC durante 10 minutos.Los bácillus suelen crecer en medios sistemáticos que contengan azúcares, ácidos orgánicos, alcoholes, etc, como única fuente de carbono y amoníaco como única fuente de nitrógeno.Análisis de Resultados:Existe varios tipos de tinciones de los cuales estudiamos:Tinción de GramTinción simpleTinción de esporasTinción de Gram:Dividida en gram positivo y gram negativo, en el caso de los gram (+) la muestra fue sarcina, puesto que una tonalidad violeta fijada en su estructura determina la presencia de la misma puesto que fijó en su estructura el cristal violeta.Y en el gran (-) utilizamos salmonella identificada por la presencia de muchas estructura un poco triangulares de color rojo.

En la muestra de la práctica anterior 3 eran gran positivo por su coloración morada.Tinción Simple:Estudia levaduras, en este experimento se usa un solo colorante que fue azul de metileno, donde observamos que las levaduras tenían cocos. Estas células bacterianas difieren desde el punto de vista químico de su medio exterior y por eso se tiñen contrastando con su alrededor.Tinción de Esporas:La bacteria es una estructura muy pequeña, sin embargo, por medio de esta tinción pudimos observar la estructura interna de la célula bacteriana, particularmente las endosporas, en este experim

ento se utiliza una tinción simple debido a que la misma permite que se coloree toda la célula excepto la espora que se observa de un tamaño bien aceptable.
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frotis
Se denomina frotis a la extensión que se realiza sobre un portaobjetos de una muestra o cultivo con objeto de separar lo más posible los microorganismos, ya que si aparecen agrupados en la preparación es muy difícil obtener una imagen clara y nítida.

Este frotis debe ser posteriormente fijado al vidrio del portaobjetos para poder aplicar los métodos habituales de tinción que permiten la observación al microscopio de las bacterias sin que la muestra sea arrastrada en los sucesivos lavados.

La fijación de una extensión bacteriana hace que las bacterias queden inactivadas y adheridas al vidrio alterando lo menos posible la morfología y bacteriana y las posibles agrupaciones de células que pudiera haber.
Colocar una pequeña gota de agua en el centro de un portaobjetos limpio. Es necesaria muy poca cantidad de agua, por lo que se puede usar el asa de siembra, ya que en el extremo curvo de su filamento queda retenida una mínima gota de agua, que resulta suficiente.
Flamear el asa de siembra, tomar, en condiciones asépticas, una pequeña cantidad del cultivo bacteriano en medio sólido y transferirlo a la gota de agua.

Remover la mezcla con el asa de siembra hasta formar una suspensión homogénea que quede bastante extendida para facilitar su secado.Si la muestra se toma de un cultivo en medio líquido, no es necesario realizar los dos primeros pasos ya que basta con colocar y extender una gota de la suspensión bacteriana, que se toma con el asa de siembra, directamente sobre el portaobjetos.
Esperar hasta que el líquido se evapore o acelerar su evaporación acercando el porta a la llama del mechero. En este caso hay que tener mucha precaución de no calentar demasiado el porta pues las células pueden deformarse o romperse.

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Control en la etapa preanalítica

En realidad se le ha prestado menos atención al establecimiento de las medidas de control de la calidad en las etapas de obtención, procesamiento y almacenamiento de las muestras que al resto del procesamiento analítico.6 En la hemostasia, la etapa preanalítica es una etapa clave, y de ella depende en gran medida el resultado final. Los objetivos de las normas de control de la calidad en la fase preanalítica son:La correcta identificación del paciente, del solicitante y de la prueba solicitada.Reducir al máximo la variabilidad intraindividual de los parámetros a medir.Evitar el deterioro de la muestra mediante los procesos de obtención, manipulación transporte y conservación.

LA ETAPA ANALÍTICA

Este paso es clave en la Planificación Estratégica porque nos va a permitir conocer cuáles sonlos principales problemas con los que nos enfrentamos, y a partir de los cuales deberemosbuscar las soluciones específicas. Requiere de un análisis realista, en él se basarán luego lasestrategias con las que se intentará revertir la situación apuntando al logro de los objetivospropuestos.En el análisis de las fortalezas y debilidades se deberán tener en cuenta los recursos humanos,tecnológicos, financieros, físicos y organizacionales. Será necesario analizar cada uno porseparado para determinar en cuáles nos vamos a apoyar. La detección de las debilidadesservirá para elaborar las estrategias de planificación.Se requerirá creatividad a la hora de evaluar los recursos y no agotar las posibilidades en unmismo en el contexto más cercano. Este es uno de los desafíos de la planificación.Los recursos humanos son las personas con las que trabajamos y las potencialidades ydebilidades que ellos y nosotros tenemos en la tarea.Los recursos tecnológicos son aquellos elementos con los que contamos para realizar mejornuestro trabajo. Cuando podemos contar con ellos nos fortalecen, cuando no, significanverdaderos puntos débiles.

etapa post-analitica:es la entrega de los resultados al paciente.

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tarea # 1

medios de cultivo

Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado más de 10.000 medios de cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuadas, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.
La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la que se añadirán otros ingredientes.
El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de medios de cultivo. Se licúa completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en él.
La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que bastantes bacterias provocan su licuación.
En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentación de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se añaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes.
También se añaden colorantes que actúan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formación de ácido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH básico y amarillo en pH ácido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayoria de las bacterias Gram-positivas).

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